Արտադրանքներ
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR հայտնաբերման հավաքածու 2019-nCoV-ի համար
Ակնկալվող օգտագործումը
Այս հավաքածուն օգտագործվում է նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) որակական հայտնաբերման համար՝ օգտագործելով կոկորդի, քթ-ըմպանի, բրոնխոալվեոլային լվացման հեղուկի և խորխի նմուշներ: Այս արտադրանքի հայտնաբերման արդյունքը միայն կլինիկական հղման համար է և չպետք է օգտագործվի որպես կլինիկական ախտորոշման և բուժման միակ ապացույց: Խորհուրդ է տրվում վիճակի համապարփակ վերլուծություն՝ հիվանդի կլինիկական դրսևորումների և այլ լաբորատոր հետազոտությունների հետ համատեղ:
Ստուգման սկզբունքը
Հավաքածուն հիմնված է միաստիճան RT-PCR տեխնոլոգիայի վրա: Փաստորեն, 2019 թվականի նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) ORF1ab և N գեները ընտրվել են որպես ուժեղացման թիրախային շրջաններ: Հատուկ պրայմերներ և ֆլուորեսցենտային զոնդեր (N գենային զոնդերը նշված են FAM-ով, իսկ ORF1ab զոնդերը՝ HEX-ով) նախատեսված են նմուշներում 2019 թվականի նոր տիպի կորոնավիրուսի ՌՆԹ-ն հայտնաբերելու համար: Հավաքածուն նաև ներառում է էնդոգեն ներքին վերահսկողության հայտնաբերման համակարգ (ներքին վերահսկողության գենային զոնդը նշված է CY5-ով)՝ նմուշների հավաքագրման, ՌՆԹ-ի և ՊՇՌ ուժեղացման գործընթացը վերահսկելու համար, այդպիսով նվազեցնելով կեղծ բացասական արդյունքները:
Հիմնական բաղադրիչներ
| Բաղադրիչներ | Հզորություն（48T/հավաքածու) |
| RT-PCR ռեակցիայի լուծույթ | 96 մկլ |
| nCOV այբբենարան TaqMan զոնդային խառնուրդ (ORF1ab, N գեն, RnaseP գեն) | 864 մկլ |
| Բացասական վերահսկողություն | 1500 մկլ |
| nCOV դրական հսկողություն (l ORF1ab N գեն) | 1500 մկլ |
Սեփական ռեակտիվներ՝ ՌՆԹ-ի արդյունահանման կամ մաքրման ռեակտիվներ։ Բացասական/դրական հսկողություն. Դրական հսկողությունը թիրախային բեկոր պարունակող ՌՆԹ է, իսկ բացասական հսկողությունը՝ նուկլեինաթթուներից զերծ ջուր։ Օգտագործման ընթացքում դրանք պետք է մասնակցեն արդյունահանմանը և պետք է համարվեն վարակիչ։ Դրանք պետք է մշակվեն և հեռացվեն համապատասխան կանոնակարգերին համապատասխան։
Ներքին հղման գենը մարդու RnaseP գենն է։
Պահպանման պայմանները և ժամկետի ավարտը
-20±5℃, խուսափեք 5 անգամից ավելի կրկնակի սառեցումից և հալեցումից, վավեր է 6 ամիս։
Կիրառելի գործիք
FAM / HEX / CY5 և այլ բազմալիք ֆլուորեսցենտ ՊՇՌ սարքի միջոցով։
Նմուշի պահանջները
1. Կիրառելի նմուշների տեսակները՝ կոկորդի քսուքներ, քթամկանի քսուքներ, բրոնխոալվեոլային լվացման հեղուկ, խորխ։
2. Նմուշի հավաքում (ասեպտիկ տեխնիկա)
Կոկորդի քսուք. միաժամանակ երկու խոզանակով սրբեք նշիկներն ու կոկորդի հետին պատը, այնուհետև խոզանակի գլխիկը ընկղմեք նմուշառման լուծույթ պարունակող փորձանոթի մեջ։
Խորխ. Հիվանդի խորը հազից հետո հազալիս խորխը հավաքեք պտուտակավոր կափարիչով փորձանոթի մեջ, որը պարունակում է նմուշառման լուծույթը. բրոնխոալվեոլյար լվացման հեղուկ. նմուշառումը կատարվում է բժշկական մասնագետների կողմից: 3. Նմուշների պահպանում և տեղափոխում
Վիրուսի մեկուսացման և ՌՆԹ թեստավորման համար նմուշները պետք է հետազոտվեն հնարավորինս շուտ։ 24 ժամվա ընթացքում հայտնաբերված նմուշները կարող են պահվել 4℃ ջերմաստիճանում, իսկ 24 ժամվա ընթացքում չհայտնաբերվածները՝ 4℃ ջերմաստիճանում։
ժամերը պետք է պահվեն -70℃ կամ ավելի ցածր ջերմաստիճանում (եթե -70℃ պահպանման պայմաններ չկան, դրանք պետք է
ժամանակավորապես պահվում է -20°C սառնարանում): Տեղափոխման ընթացքում նմուշները պետք է խուսափեն կրկնակի սառեցումից և հալեցումից: Նմուշները պետք է լաբորատորիա ուղարկվեն հավաքագրումից հետո հնարավորինս շուտ: Եթե անհրաժեշտ է նմուշները տեղափոխել երկար հեռավորությունների վրա, խորհուրդ է տրվում պահել չոր սառույցով:
Փորձարկման մեթոդներ
1. Նմուշի մշակում և ՌՆԹ-ի արդյունահանում (նմուշի մշակման տարածք)
ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար խորհուրդ է տրվում վերցնել 200 մկլ հեղուկ նմուշ: Արդյունահանման հետ կապված քայլերի համար դիմեք առևտրային ՌՆԹ արդյունահանման հավաքածուների հրահանգներին: Ե՛վ բացասական, և՛ բացասական
Այս հավաքածուի վերահսկիչները ներգրավված էին արդյունահանման մեջ։
2 ՊՇՌ ռեակտիվի պատրաստում (ռեակտիվի պատրաստման տարածք)
2.1 Հանեք բոլոր բաղադրիչները հավաքածուից, հալեցրեք և խառնեք սենյակային ջերմաստիճանում: Օգտագործելուց առաջ մի քանի վայրկյան ցենտրիֆուգացրեք 8000 պտ/րոպե արագությամբ, հաշվարկեք ռեակտիվների անհրաժեշտ քանակը, և ռեակցիայի համակարգը պատրաստեք հետևյալ աղյուսակում նշվածի համաձայն.
| Բաղադրիչներ | N չափաբաժին (25 մկլ համակարգ) |
| nCOV այբբենարան TaqMan զոնդային խառնուրդ | 18 մկլ × Ն |
| RT-PCR ռեակցիայի լուծույթ | 2 մկլ × Ն |
| *N = փորձարկված նմուշների քանակը + 1 (բացասական հսկողություն) + 1 (nCOV)դրական վերահսկողություն) | |
2.2 Բաղադրիչները լավ խառնելուց հետո կարճ ժամանակով ցենտրիֆուգացրեք, որպեսզի խողովակի պատի վրայի ամբողջ հեղուկը թափվի խողովակի հատակին, ապա 20 մկլ ուժեղացման համակարգը ալիքվոտավորեք ՊՇՌ խողովակի մեջ։
3. Նմուշառում (նմուշի պատրաստման տարածք)
Էքստրակցիայից հետո ավելացրեք 5 մկլ բացասական և դրական վերահսկիչ նյութեր: Փորձարկվող նմուշի ՌՆԹ-ն ավելացվում է ՊՇՌ ռեակցիայի խողովակին:
Խստորեն փակեք խողովակը և մի քանի վայրկյան ցենտրիֆուգացրեք 8000 պտ/րոպե արագությամբ, նախքան այն ուժեղացման հայտնաբերման տարածք տեղափոխելը։
4 ՊՇՌ ուժեղացում (ուժեղացված հայտնաբերման տարածք)
4.1 Տեղադրեք ռեակցիայի խողովակը սարքի նմուշային խցիկի մեջ և սահմանեք հետևյալ պարամետրերը՝
| փուլ | Հեծանիվ համարը | Ջերմաստիճան(°C) | Ժամանակ | հավաքածուկայք |
| Հակադարձտառադարձություն | 1 | 42 | 10 րոպե | - |
| Նախնական դենատուրացիաn | 1 | 95 | 1 րոպե | - |
| Հեծանիվ | 45 | 95 | 15 վայրկյան | - |
| 60 | 30-ականներ | տվյալների հավաքագրում |
Սարքի հայտնաբերման ալիքի ընտրություն. Ֆլուորեսցենցիայի ազդանշանի համար ընտրեք FAM, HEX, CY5 ալիքը: Հղման ֆլուորեսցենտային NONE-ի դեպքում, խնդրում ենք չընտրել ROX:
5 Արդյունքների վերլուծություն (Կարգավորման համար խնդրում ենք դիմել յուրաքանչյուր սարքի փորձարարական հրահանգներին)
Ռեակցիայից հետո պահպանեք արդյունքները։ Վերլուծությունից հետո լոգարիթմական գրաֆիկում կարգավորեք սկզբնական արժեքը, վերջնական արժեքը և շեմային արժեքը՝ ըստ պատկերի (օգտատերը կարող է կարգավորել ըստ իրական իրավիճակի, սկզբնական արժեքը կարող է սահմանվել 3~15, վերջնական արժեքը կարող է սահմանվել 5~20, կարգավորում)։ Պատուհանի շեմային կետում շեմային գիծը գտնվում է լոգարիթմական փուլում, իսկ բացասական վերահսկողության ուժեղացման կորը ուղիղ գիծ է կամ շեմային գծից ցածր։
6 Որակի հսկողություն (փորձարկման մեջ ներառված է ընթացակարգային հսկողություն) Բացասական հսկողություն. FAM, HEX, CY5 հայտնաբերման ալիքների համար ակնհայտ ուժեղացման կոր չկա։
COV դրական հսկողություն. FAM և HEX հայտնաբերման ալիքների ակնհայտ ուժեղացման կոր, Ct արժեք ≤32, բայց CY5 ալիքի ուժեղացման կոր չկա։
Վերոնշյալ պահանջները պետք է բավարարվեն միաժամանակ նույն փորձի ընթացքում, հակառակ դեպքում փորձը անվավեր է և պետք է կրկնվի։
7 Արդյունքների որոշում։
7.1 Եթե փորձարկվող նմուշի FAM և HEX ալիքներում չկա ամպլիֆիկացման կոր կամ Ct արժեքը > 40 է, և CY5 ալիքում կա ամպլիֆիկացման կոր, կարելի է դատել, որ նմուշում չկա 2019 նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) ՌՆԹ։
.2 Եթե փորձարկման նմուշն ունի ակնհայտ ուժեղացման կորեր FAM և HEX ալիքներում, և Ct արժեքը ≤40 է, կարելի է դատել, որ նմուշը դրական է 2019 թվականի նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) նկատմամբ։
7.3 Եթե փորձարկվող նմուշը FAM-ի կամ HEX-ի միայն մեկ ալիքում ունի հստակ ուժեղացման կոր, և Ct արժեքը ≤40 է, իսկ մյուս ալիքում ուժեղացման կոր չկա, արդյունքները պետք է վերստուգվեն։ Եթե վերստուգման արդյունքները համապատասխան են, նմուշը կարող է դրական համարվել նորի համար։
կորոնավիրուս 2019 (2019-nCoV): Եթե կրկնակի թեստի արդյունքը բացասական է, կարելի է դատել, որ նմուշը բացասական է 2019 թվականի նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) նկատմամբ:
Դրական դատողության արժեք
ROC կորի մեթոդը օգտագործվում է հավաքածուի CT հղման արժեքը որոշելու համար, իսկ ներքին վերահսկողության հղման արժեքը 40 է։
Փորձարկման արդյունքների մեկնաբանություն
1. Յուրաքանչյուր փորձ պետք է ստուգվի բացասական և դրական վերահսկիչների համար: Փորձարկման արդյունքները կարող են որոշվել միայն այն դեպքում, երբ վերահսկիչները համապատասխանում են որակի վերահսկման պահանջներին:
2. Երբ FAM և HEX հայտնաբերման ալիքները դրական են, CY5 ալիքի (ներքին կառավարման ալիք) արդյունքը կարող է բացասական լինել համակարգի մրցակցության պատճառով։
3. Երբ ներքին վերահսկողության արդյունքը բացասական է, եթե փորձանոթի FAM և HEX հայտնաբերման ալիքները նույնպես բացասական են, դա նշանակում է, որ համակարգը անջատված է կամ գործողությունը սխալ է, այսինքն՝ թեստը անվավեր է։ Հետևաբար, նմուշները պետք է վերստուգվեն։
