Ապրանքներ
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR հայտնաբերման հավաքածու 2019-nCoV-ի համար
Սպասվող օգտագործումը
Այս հավաքածուն օգտագործվում է նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) որակական հայտնաբերման համար՝ օգտագործելով կոկորդային շվաբրեր, քթանցքային շվաբրեր, բրոնխոալվեոլային լվացման հեղուկ, խորխ: Կլինիկական ախտորոշման և բուժման ապացույցներ: Առաջարկվում է վիճակի համապարփակ վերլուծություն՝ հիվանդի կլինիկական դրսևորումների և այլ լաբորատոր հետազոտությունների հետ համատեղ:
Ստուգման սկզբունքը
Հավաքածուն հիմնված է մեկ քայլով RT-PCR տեխնոլոգիայի վրա:Փաստորեն, 2019 թվականի նոր կորոնավիրուսի (2019-nCoV) ORF1ab և N գեները ընտրվել են որպես ուժեղացման թիրախային շրջաններ։Հատուկ պրայմերները և լյումինեսցենտային զոնդերը (N գենային զոնդերը պիտակավորված են FAM-ով, իսկ ORF1ab զոնդերը պիտակավորված են HEX-ով) նախատեսված են 2019-ի նոր տիպի կորոնավիրուսային ՌՆԹ-ի նմուշներում հայտնաբերելու համար:Հավաքածուն ներառում է նաև ներքին հսկողության հայտնաբերման էնդոգեն համակարգ (ներքին հսկողության գենային զոնդ՝ պիտակավորված CY5-ով) նմուշների հավաքման, ՌՆԹ-ի և ՊՇՌ-ի ամպլիֆիկացիայի գործընթացը վերահսկելու համար՝ դրանով իսկ նվազեցնելով կեղծ բացասական արդյունքները:
Հիմնական բաղադրիչներ
| Բաղադրիչներ | Ծավալը(48T/Kit） |
| RT-PCR ռեակցիայի լուծույթ | 96 մկլ |
| nCOV այբբենարան TaqMan զոնդային խառնուրդ (ORF1ab, N գեն, RnaseP գեն) | 864 մկլ |
| Բացասական վերահսկողություն | 1500 մկլ |
| nCOV դրական հսկողություն (l ORF1ab N գեն) | 1500 մկլ |
Սեփական ռեակտիվներ՝ ՌՆԹ արդյունահանման կամ մաքրման ռեակտիվներ:Բացասական/դրական հսկողություն. Դրական հսկողությունը թիրախային բեկոր պարունակող ՌՆԹ-ն է, մինչդեռ բացասական վերահսկողությունը նուկլեինաթթուից զերծ ջուրն է:Օգտագործման ընթացքում դրանք պետք է մասնակցեն արդյունահանմանը և պետք է համարվեն վարակիչ:Դրանք պետք է վարվեն և հեռացվեն համապատասխան կանոնակարգերի համաձայն:
Ներքին հղումային գենը մարդու RnaseP գենն է:
Պահպանման պայմանները և պիտանելիության ժամկետը
-20±5℃, խուսափել 5-ից ավելի անգամ կրկնվող սառեցումից և հալվելուց, վավերական է 6 ամիս:
Կիրառելի գործիք
FAM / HEX / CY5 և այլ բազմալիքային ֆլուորեսցենտային PCR գործիքով:
Նմուշի պահանջները
1. Կիրառելի նմուշների տեսակները՝ կոկորդի շվաբրեր, քթանցքային շվաբրեր, բրոնխոալվեոլային լվացման հեղուկ, խորխ:
2. Նմուշների հավաքում (ասեպտիկ տեխնիկա)
Ֆարինգիալ շվաբր. Սրբեք նշագեղձերը և կեղևի հետևի պատը միաժամանակ երկու շվաբրով, այնուհետև շվաբրի գլուխը ընկղմեք փորձանոթի մեջ, որը պարունակում է նմուշառման լուծույթ:
Խորխը. հիվանդի խորը հազից հետո հազալու թուքը հավաքեք պտուտակային գլխարկով փորձանոթի մեջ, որը պարունակում է նմուշառման լուծույթ;Բրոնխոալվեոլային լվացման հեղուկ: Նմուշառում բժշկական մասնագետների կողմից:3. Նմուշների պահպանում և տեղափոխում
Վիրուսի մեկուսացման և ՌՆԹ-ի փորձարկման նմուշները պետք է հնարավորինս շուտ փորձարկվեն:Նմուշները, որոնք կարող են հայտնաբերվել 24 ժամվա ընթացքում, կարող են պահվել 4℃ ջերմաստիճանում;նրանք, որոնք հնարավոր չէ հայտնաբերել 24-ի ընթացքում
ժամերը պետք է պահվեն -70℃ կամ ցածր ջերմաստիճանում (եթե -70℃ պահպանման պայմաններ չկան, դրանք պետք է լինեն.
ժամանակավորապես պահվում է -20℃ սառնարանում):Տեղափոխման ընթացքում նմուշները պետք է խուսափեն կրկնակի սառչելուց և հալվելուց:Նմուշները հավաքելուց հետո հնարավորինս շուտ պետք է ուղարկվեն լաբորատորիա:Եթե նմուշները պետք է տեղափոխվեն երկար հեռավորությունների վրա, խորհուրդ է տրվում պահել չոր սառույցով:
Փորձարկման մեթոդներ
1 Նմուշների մշակում և ՌՆԹ արդյունահանում (նմուշի մշակման տարածք)
ՌՆԹ արդյունահանման համար խորհուրդ է տրվում վերցնել 200 մկլ հեղուկ նմուշ:Արդյունահանման հետ կապված քայլերի համար տես ՌՆԹ-ի արդյունահանման առևտրային փաթեթների հրահանգները:Ե՛վ բացասական, և՛ բացասական
Այս հավաքածուի հսկիչ սարքերը ներգրավված էին արդյունահանման մեջ:
2 PCR ռեագենտի պատրաստում (ռեագենտի պատրաստման տարածք)
2.1 Հեռացրեք բոլոր բաղադրիչները հավաքածուից և հալեցրեք և խառնեք սենյակային ջերմաստիճանում:Օգտագործելուց առաջ մի քանի վայրկյան ցենտրիֆուգեք 8000 ռ/րոպե արագությամբ;հաշվարկել ռեակտիվների անհրաժեշտ քանակությունը, և ռեակցիայի համակարգը պատրաստվում է, ինչպես ցույց է տրված հետևյալ աղյուսակում.
| Բաղադրիչներ | N մատուցում (25µl համակարգ) |
| nCOV այբբենարան TaqMan զոնդային խառնուրդ | 18 μl × N |
| RT-PCR ռեակցիայի լուծույթ | 2 μl × N |
| *N = փորձարկված նմուշների քանակը + 1 (բացասական հսկողություն) + 1 (nCOVդրական վերահսկողություն) | |
2.2 Բաղադրիչները մանրակրկիտ խառնելուց հետո կարճ ժամանակով ցենտրիֆուգեք, որպեսզի խողովակի պատի ամբողջ հեղուկը ընկնի խողովակի հատակը, այնուհետև բաժանեք 20 մկլ ուժեղացման համակարգը PCR խողովակի մեջ:
3 Նմուշառում (նմուշի պատրաստման տարածք)
Արդյունահանումից հետո ավելացրեք 5 մկլ բացասական և դրական հսկիչները:Փորձարկվող նմուշի ՌՆԹ-ն ավելացվում է PCR ռեակցիայի խողովակին:
Խողովակը սերտորեն փակեք և մի քանի վայրկյան ցենտրիֆուգեք 8000 պտույտ/րոպե արագությամբ, նախքան այն տեղափոխեք ուժեղացման հայտնաբերման տարածք:
4 PCR ուժեղացում (ուժեղացված հայտնաբերման տարածք)
4.1 Տեղադրեք ռեակցիայի խողովակը գործիքի նմուշի բջիջում և սահմանեք պարամետրերը հետևյալ կերպ.
| փուլ | Ցիկլ թիվ | Ջերմաստիճանը(°C) | Ժամանակը | հավաքածուկայք |
| Հակադարձարտագրում | 1 | 42 | 10 րոպե | - |
| Pre-denaturationn | 1 | 95 | 1 րոպե | - |
| Ցիկլ | 45 | 95 | 15-ական թթ | - |
| 60 | 30-ական թթ | տվյալների հավաքագրումը |
Գործիքների հայտնաբերման ալիքի ընտրություն. Ընտրեք FAM, HEX, CY5 ալիքը լյումինեսցենտային ազդանշանի համար:Հղման լյումինեսցենտային ՈՉ ՄԻ, խնդրում ենք մի ընտրեք ROX-ը:
5 Արդյունքների վերլուծություն (Կարգավորման համար խնդրում ենք դիտել յուրաքանչյուր գործիքի փորձարարական հրահանգները)
Արձագանքից հետո պահպանեք արդյունքները:Վերլուծությունից հետո կարգավորեք ելակետային արժեքը, ավարտական արժեքը և ելակետային արժեքը՝ ըստ պատկերի (օգտագործողը կարող է հարմարեցնել ըստ փաստացի իրավիճակի, մեկնարկային արժեքը կարող է սահմանվել 3~15, ավարտի արժեքը՝ 5~20, ճշգրտում) լոգարիթմական գրաֆիկում Պատուհանի շեմին շեմային գիծը գտնվում է լոգարիթմական փուլում, իսկ բացասական հսկողության ուժեղացման կորը ուղիղ գիծ է կամ շեմի գծից ցածր):
6 Որակի հսկողություն (Թեստում ներառված է ընթացակարգային հսկողություն) Բացասական հսկողություն. FAM, HEX, CY5 հայտնաբերման ալիքների համար ակնհայտ ուժեղացման կոր չկա:
COV դրական հսկողություն. FAM և HEX հայտնաբերման ալիքների ակնհայտ ուժեղացման կոր, Ct արժեք≤32, բայց առանց CY5 ալիքի ուժեղացման կորի;
Վերոնշյալ պահանջները պետք է կատարվեն միաժամանակ նույն փորձի ժամանակ.հակառակ դեպքում փորձն անվավեր է և պետք է կրկնվի:
7 Արդյունքների որոշում.
7.1 Եթե փորձարկման նմուշի FAM և HEX ալիքներում չկա ուժեղացման կոր կամ Ct արժեք> 40, իսկ CY5 ալիքում կա ուժեղացման կոր, կարելի է դատել, որ չկա 2019 թվականի նոր կորոնավիրուս (2019-nCoV) ՌՆԹ նմուշում;
.2 Եթե փորձանմուշն ունի ուժեղացման ակնհայտ կորեր FAM և HEX ալիքներում, իսկ Ct արժեքը ≤40 է, կարելի է դատել, որ նմուշը դրական է 2019 թվականի նոր կորոնավիրուսի համար (2019-nCoV):
7.3 Եթե փորձանմուշը FAM-ի կամ HEX-ի միայն մեկ ալիքում ունի հստակ ուժեղացման կոր, իսկ Ct-ի արժեքը ≤40 է, իսկ մյուս ալիքում ուժեղացման կոր չկա, ապա արդյունքները պետք է նորից փորձարկվեն:Եթե վերստուգման արդյունքները համահունչ են, ապա նմուշը կարելի է գնահատել որպես դրական նորի համար
կորոնավիրուս 2019 (2019-nCoV):Եթե վերստուգման արդյունքը բացասական է, ապա կարելի է դատել, որ նմուշը բացասական է 2019 թվականի նոր կորոնավիրուսի համար (2019-nCoV):
Դրական դատողության արժեքը
ROC կորի մեթոդը օգտագործվում է հավաքածուի տեղեկատու CT արժեքը որոշելու համար, իսկ ներքին հսկողության հղման արժեքը 40 է:
Թեստի արդյունքների մեկնաբանություն
1. Յուրաքանչյուր փորձ պետք է փորձարկվի բացասական և դրական վերահսկման համար:Փորձարկման արդյունքները կարող են որոշվել միայն այն դեպքում, երբ հսկիչները համապատասխանում են որակի վերահսկման պահանջներին
2. Երբ FAM և HEX հայտնաբերման ալիքները դրական են, CY5 ալիքի (ներքին կառավարման ալիքի) արդյունքը կարող է բացասական լինել՝ համակարգի մրցակցության պատճառով:
3. Երբ ներքին հսկողության արդյունքը բացասական է, եթե փորձանոթի FAM և HEX հայտնաբերման ալիքները նույնպես բացասական են, դա նշանակում է, որ համակարգը անջատված է կամ աշխատանքը սխալ է, ապա թեստն անվավեր է:Հետևաբար, նմուշները պետք է նորից փորձարկվեն:
